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本文介紹了紫外-可見分光光度計透射比準確度在不同的吸光度測量范圍對測量結(jié)果的影響, 從而在儀器的使 用上應選擇在合適的吸光度范圍內(nèi)。

紫外-可見分光光度計是一種現(xiàn)代化的集光、 機、電、計算機為一體的分析儀器,它廣泛應用于有機 化學、生物化學 、藥品分析、食品檢驗、醫(yī)療衛(wèi)生、環(huán)境 保護、生命科學等領域;它將對研究人類的生存, 發(fā)展 和生態(tài)平衡提供有力的保障。如何正確理解紫外 - 可見分光光度計的各項關鍵指標并正確使用,對我們 的分析有著重要意義 。在工作中經(jīng)常遇到不同的單 位或同一單位用兩臺經(jīng)過計量檢定合格的紫外-可 見分光光度計對同一被測樣品進行測量,經(jīng)過比較測 量結(jié)果偏差較大,從而無法定論。實際上他們沒有注 意到不同的儀器在吸光度不同的使用范圍 ,儀器的透 射比(吸光度)準確度對測量結(jié)果的影響是不一樣的。 下面試述兩臺經(jīng)過計量檢定合格的紫外-可見分光 光度計透射比準確度對測量結(jié)果的影響。 *, 紫外 -可見分光光度計是根據(jù)物質(zhì) 的分子對紫外、可見區(qū)輻射(光)產(chǎn)生的吸收光譜和 的朗伯-比耳定律測量物質(zhì)的性質(zhì)和含量的分 析儀器。它可以用下面的數(shù)學公式描述 : A =-lo gτ=εbC 式中 , A 為吸光度;τ為透射比 ;ε為摩爾吸光系 數(shù);b 為液層厚度;C 為濃度。 朗伯-比耳定律是光度分析中定量分析的基 礎、根本的依據(jù) 。從理論上說,朗伯 -比耳定律只 適用于單色光,均勻、相互獨立的無相互作用的吸收 粒子體系,因此非單色光 ,化學因素, 雜散光, 及測定 時的溫度 ,壓力、光學傳感器的非線性、電子學的噪 聲、儀器的光譜帶寬等都可引起朗伯 -比耳定律的偏 離。在實際工作中,除了要注意測試波長和參比溶液 的選擇外,若被測樣品的吸光度太大(濃度太高)或太 小(濃度太稀),都可能產(chǎn)生朗伯-比耳定律的偏離。 如按照 JJG375 -1996《單光束紫外 -可見分光 光度計》和 JJG682 -1990《雙光束紫外 -可見分光 光度計計》計量檢定規(guī)程要求,目前我國評價高精度 紫外-可見分光光度計儀器的透射比準確度在 ±0 . 5 %τ范圍內(nèi), 則該儀器合格。

表 1 列出了一臺儀器 的透射比準確度為 +0 .5 %τ, 一臺儀器的透射比準 確度為 -0 .5 %τ的兩臺儀器在 2 %-98 %的透射比 范圍內(nèi)測量結(jié)果之間的比較通過上面數(shù)據(jù)可以看出, 當一臺儀器透射比準 確度為正誤差極限, 和另一臺儀器透射比準確度為 負誤差極限 ,并且透射比大于 80 %τ(吸光度小于 0 . 071A),或小于 10 %τ(吸光度大于 1 .301A)時, 兩臺 儀器測量結(jié)果的相對誤差較大, 因此一般的紫外 - 可見分光光度計不適合高濃度和極低濃度的分析, 因此應該通過改變待測樣品的濃度或改變吸收池厚 度 ,是被測樣品的吸光度處在適當?shù)姆秶鷥?nèi),才能使 兩者測量數(shù)據(jù)較為一致性。