伴隨著分光光度計在各領(lǐng)域內(nèi)廣泛應(yīng)用,分光光度 計所起到的作用日益凸顯,但是部分單位對分光光度計原理了 解有限,所以本文就分光光度法、分光光度原理及應(yīng)用進行分 析研究,希望能夠增加對分光光度法及分光光度計的了解 程度。
分光光度法是在比色法的基礎(chǔ)條件之上所發(fā)展出來的。 比色法在實際應(yīng)用過程中,僅僅局限于應(yīng)用在可見光驅(qū)內(nèi),但 是分光光度法能夠在紫外光與紅外光內(nèi)去應(yīng)用。比色法主要 應(yīng)用單色光,所涉及到的譜帶寬度和整體精度都十分有限。分 光光度法與真正單色光較為貼近,光譜帶寬度不會超過35mm, 能夠?qū)ψ贤鈪^(qū)域內(nèi)1mm以下進行檢測,具有良好的度。
1 光的基本知識 光主要是由光量子所構(gòu)成,具有十分顯著的二重性,也就 是微粒不連續(xù)性與波動連續(xù)性,光在波長與頻率上面具有波動 特征,能夠通過 λ = c v 表示。其中 λ表示光所具有的波長,波長 為振動相同臨界點之間所具有的距離,v表示光頻率,也就是光 在每秒內(nèi)振動的次數(shù),c表示光傳播速度。 光屬于電磁波內(nèi)的一種。在自然界內(nèi)的電磁波類別較多, 電磁爐波長不同,分光光度法所應(yīng)用到的光譜主要控制在 200mm與10 υ 之間,其中包含三個光驅(qū),分別是紫外光區(qū)、可見 光區(qū)與紅外光區(qū)。
2 吸收光譜原理 分子在物質(zhì)內(nèi)運動可以分為三種形式,分別是電子運動、 分子內(nèi)原子振動、分子自身轉(zhuǎn)動,所以一共具有三個能級,分別 是電子能級、振動能級、轉(zhuǎn)動能級。光在照射分子之后,分子將 會吸收光的能量,進而產(chǎn)生能級躍遷,也就是完成從基態(tài)能級 到激發(fā)能級的轉(zhuǎn)變。不同能級所需要的能量數(shù)量也不同,這就 需要應(yīng)用不同電磁波進行激發(fā)。電子能級在躍遷過程中所需 要的能量要是越多,基本上都處于可見光區(qū)域或者是紫外光區(qū) 域內(nèi),這種光譜被稱之為紫外光及可見光光譜。分子在被紅外 線照射之后,分子所吸收到的能量無法完成電子能級的躍遷, 僅僅能夠讓分子完成振動能級與轉(zhuǎn)動能級之間的轉(zhuǎn)換,進而所 得到的光譜也就是紅外光譜。分子要是被比外紅外線光源進 行照射,分子僅僅能夠完成轉(zhuǎn)動能級的轉(zhuǎn)變,這樣所得到的光 譜為遠紅外光譜。物質(zhì)所具有的結(jié)構(gòu)要是不同,在完成能級躍 遷過程中所需要吸收的能量也就存在一定差異,對于光源吸收 速度也就不同,不同物質(zhì)都具有自身特殊的光帶,進而人們就 能夠?qū)Σ煌镔|(zhì)進行分辨。這也是光度法在實際應(yīng)用分析的 前提條件。按照郎伯比耳定律可知,溶液、溫度與光源波長在 相同情況之下,溶液內(nèi)所具有的光密度與溶液厚度之間應(yīng)該呈 現(xiàn)正比例關(guān)聯(lián);要是溶液厚度要是一定的情況下,溶液濃度與 光密度僅僅具有關(guān)聯(lián),被測物質(zhì)濃度與吸光度之間呈現(xiàn)正比例 關(guān)聯(lián),光度法在分析過程中就是應(yīng)用該理論依據(jù) 。
3 分光光度計構(gòu)造原理 復(fù)合光在經(jīng)過分光系統(tǒng)之后,會分散成為不同波長的單色 光,對其中任意一個波長單色光進行分析研究,能夠?qū)y試物 質(zhì)光吸收能力進行判斷,這種方法就是分光光度法。分光光度 法在測量過程中所應(yīng)用到的設(shè)備稱之為分光光度計。雖然分 光光度計型號存在一定差異,但是分光光度計的結(jié)構(gòu)基本相 同,主要有五部分構(gòu)成,分別是光源、單色器、樣品吸收池、檢測 系統(tǒng)與信號指示系統(tǒng) 。
3.1光源 能夠被作為光源的較多,例如鎢燈、鹵鎢燈、激光、紅外線 等。例如鎢燈要是作為光源,所產(chǎn)生的光譜為連續(xù)光譜,適合 在3600000nm 范圍內(nèi)應(yīng)用,在應(yīng)用過程中具有良好的穩(wěn)定性, 主要是作為可見光光源。
3.2單色器 單色器是分光光度計基礎(chǔ)構(gòu)建,主要是將混合光源轉(zhuǎn)變?yōu)?單色光,同時為檢測提供針對波長光源。單色器主要由四部分 構(gòu)成,分別是入口狹縫、出口狹縫、色散元件及準直鏡,其中 為重要元件為色散元件,色散元件還可以分為棱鏡與光柵兩種 類別。 3.2.1棱鏡 棱鏡主要作用是將混合光分解為單色光,正常情況下為三 角柱體。棱鏡要是由不同原材料生產(chǎn)而成,透光范圍也存在一 定差異。棱鏡要是應(yīng)用玻璃制成,所得到的光譜就是可見光 譜;要是應(yīng)用石英制成,所得到的光譜就是紫外光譜 。
3.2.2光柵單色器 光柵還可以作為單色器內(nèi)的色散構(gòu)建,主要是在金屬表面 上刻畫出多個槽,需要特別注意不同槽之間距離應(yīng)該相等,并 且相互平行。光在經(jīng)過槽反射之后,容易出現(xiàn)色散情況。部分 分光系統(tǒng)就是以光柵作為基礎(chǔ)理論,在玻璃或者是石英表面上 刻畫出多個槽,通過光干涉及衍射特征,完成混合光分散操作, 得到針對性光譜。
3.3 狹縫 狹縫主要表示光路上面由隔板所形成的縫隙,主要作用對 單色光強度及純度進行調(diào)節(jié),同時也能夠?qū)紊夥直媪υ斐?影響。狹縫寬度基本上控制在2mm之內(nèi),棱鏡分散能力也會根 據(jù)波長的改變發(fā)生變化,分光光度計所具有的狹縫寬度能夠與 棱鏡分散能力一共進行調(diào)整。
3.4 檢測器系統(tǒng) 盡速在光源照射之下會產(chǎn)生電流,光源強度要是越大,電 流數(shù)值也就會越高,也就是光電效應(yīng)。檢測器系統(tǒng)主要是根據(jù) 檢測器所產(chǎn)生的光電流進行檢測,完成對數(shù)字結(jié)果的轉(zhuǎn)變。
4 結(jié)語 分光光度法與分光光度計在實際應(yīng)用過程中,主要應(yīng)用在 溶液內(nèi)物質(zhì)濃度檢測上面,通過分析溶液吸光度差異,能夠得 到不同溶液所具有的吸光度,進而繪制標準示意圖,這樣就能 夠了解未知溶液吸光度,進而了解未知溶液所具有的濃度,具 有良好的靈敏性與抗干擾性。
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